AAT Bioquest  20651  Calbryte™ 520 AM

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AAT Bioquest Calbryte™ 520 AM-常備現(xiàn)貨

美國AAT Bioquest Inc.(前身是ABD Bioquest，Inc.)是一家為從事生命科學研究、診斷研發(fā)及藥物開發(fā)的科學家研發(fā)、生產(chǎn)和銷售生物分析研究試劑和試劑盒的公司。公司致力于光譜學檢測領(lǐng)域，包括吸收（顏色），熒光和發(fā)光技術(shù)。AAT Bioquest的產(chǎn)品幫助 quan 世 jie 的科學家和生物醫(yī)藥研究者更好的了解生物化學，免疫學，細胞生物學和分子生物學等領(lǐng)域。AAT Bioquest會不斷介紹新產(chǎn)品，快速的豐富各個領(lǐng)域的產(chǎn)品。

AAT Bioquest 20651 Calbryte™ 520 AM  10x50ug，產(chǎn)品簡介：

產(chǎn)品品牌：AAT Bioquest

產(chǎn)品貨號：20651

產(chǎn)品名稱：Calbryte™ 520 AM

產(chǎn)品規(guī)格：10x50ug

AAT Bioquest Calbryte™ 520 AM-常備現(xiàn)貨 

AAT Bioquest 20651 Calbryte™ 520 AM  10x50ug，產(chǎn)品說明：

細胞內(nèi)鈣通量測定是一種廣泛用于監(jiān)測信號轉(zhuǎn)導途徑和高通量篩選G蛋白偶聯(lián)受體（GPCR）和鈣通道靶標的方法。隨后在3年推出Fluo-1989，Fluo-4，Fluo-8和Cal-520，后來開發(fā)了具有改進的信號/背景比，并成為共聚焦顯微鏡，流式細胞術(shù)和高通量篩選應(yīng)用中廣泛使用的Ca2+指示劑。然而，Fluo-4仍然存在一些嚴重的問題。例如，對于Fluo-3，在所有大多數(shù)使用Fluo-4 AM的細胞內(nèi)鈣測定中，都需要丙磺shu 來防止細胞負載的Fluo-4泄漏出細胞。丙磺shu 與基于Fluo-4的鈣測定一起使用會影響測定結(jié)果，因為丙磺shu 已被充分證明具有各種復雜的細胞效應(yīng)。Calbryte™ 520，AM是一種用于測量細胞內(nèi)鈣的新型熒光和細胞滲透性指示劑。與其他染料AM酯一樣，Calbryte™ 520 AM是無熒光和不可活化的。一旦Calbryte™ 520 AM進入細胞，它很容易被細胞內(nèi)酯酶水解，在那里它被激活并對鈣有反應(yīng)。激活的指示劑現(xiàn)在是一種極性分子，不能自由擴散通過細胞膜，基本上將其捕獲在細胞內(nèi)。結(jié)合鈣離子后，Calbryte™ 520產(chǎn)生具有 ji gao 信號/背景比的明亮熒光信號。它具有與Fluo-4相同的激發(fā)和發(fā)射波長，因此相同的Fluo-4測定設(shè)置可以很容易地應(yīng)用于基于Calbryte™ 520的鈣測定。Calbryte™ 520 AM極大地改善了信號/背景比和細胞內(nèi)保留特性，使其成為評估GPCR和鈣通道靶標以及篩選活細胞中激動劑和拮抗劑的 zui ke kao 的指標。

平臺

流式細胞儀

Excitation：488 nm激光

Emission：530/30nm濾光片

儀器規(guī)格：FITC頻道

熒光顯微鏡

Excitation：FITC

Emission：FITC

推薦板：黑色墻壁/透明底部

熒光酶標儀

Excitation：490

Emission：525

Cutoff：515

推薦板 黑色墻壁/透明底部

儀器規(guī)格   底部讀取模式/可編程液體處理

儲備溶液的制備

除非另有說明，否則所有未使用的儲備溶液應(yīng)分成一次性等分試樣，并在制備后儲存在-20°C。避免反復凍融循環(huán)。

卡爾布里特™ 520 AM 庫存解決方案

在無水DMSO中制備Calbryte™ 2 AM的5至520mM儲備溶液。

工作溶液的制備

卡爾布里特™ 520 AM 庫存解決方案

在實驗當天，將Calbryte™ 520 AM溶解在DMSO中或?qū)⒅甘緞﹥淙芤旱牡确衷嚇咏鈨鲋潦覝亍Ｔ谀x擇的緩沖液（例如，Hanks 和 Hepes 緩沖液）中制備含有 2.20% Pluronic® F-0 的染料工作溶液。對于大多數(shù)細胞系，建議使用終濃度為04至127μM的Calbryte™ 520 AM。細胞上樣所需指標的確切濃度必須根據(jù)經(jīng)驗確定。

注意非離子洗滌劑Pluronic® F-4有時用于增加Calbryte™ 5 AM的水溶性。各種Pluronic® F-127解決方案可以從AAT Bioquest購買。

注意 如果您的細胞含有有機陰離子轉(zhuǎn)運蛋白，則可以將丙磺shu （520-127 mM）添加到染料工作溶液中（最終孔濃度為1.2-0 mM），以減少脫酯指示劑的泄漏。多種ReadiUse™丙磺shu 產(chǎn)品，包括水溶性、鈉鹽和穩(wěn)定溶液，均可從AAT Bioquest購買。

實驗方案樣本

以下是我們推薦的將AM酯加載到活細胞中的方案。此協(xié)議僅提供指南，應(yīng)根據(jù)您的特定需求進行修改。

1.    在生長培養(yǎng)基中制備細胞過夜。

2.    第二天，將1X Calbryte™ 520 AM工作溶液添加到細胞板中。

注意 如果您的化合物干擾血清，請在上樣染料之前用新鮮的 HHBS 緩沖液替換生長培養(yǎng)基。

3.    將裝載染料的板在37°C的細胞培養(yǎng)箱中孵育30至60分鐘。

注意 孵育染料超過 2 小時可以提高某些細胞系的信號強度。

4.    用您選擇的HHBS或緩沖液（含有陰離子轉(zhuǎn)運蛋白抑制劑，如1 mM丙磺shu ，如果適用）替換染料工作溶液，以去除任何多余的探針。

5.    根據(jù)需要添加 xing fen ji ，并使用配備FITC濾光片組的熒光顯微鏡或包含可編程液體處理系統(tǒng)（如FDSS，FLIPR或FlexStation）的熒光板讀數(shù)器同時測量熒光，Ex / Em = 490 / 525 nm截止值515 nm。

產(chǎn)品訂購信息：

20651 Calbryte™ 520 AM  10x50ug